注意事項(xiàng)
1、電泳中使用的溴化乙錠（EB）為中度毒性、強(qiáng)致癌性物質(zhì)，務(wù)必小心，勿沾染于衣物、
皮膚、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在專門(mén)電泳區(qū)域操作，戴一次性手套，并及時(shí)更換。
2、預(yù)先加入EB 時(shí)可能使 DNA 的運(yùn)動(dòng)速度下降15%左右，且不同構(gòu)型的 DNA 的影響程度不同。所以為取得較真實(shí)的電泳結(jié)果可以在電泳結(jié)束后再用 0.5μg/ml 的 EB 溶液浸泡染色。EB在光照下易降解，若凝膠放置一段時(shí)間后才觀察，即使原來(lái)膠內(nèi)或樣品已加 EB，建議選擇EB溶液浸泡染色。
3、加樣進(jìn)膠時(shí)不要形成氣泡，需在凝膠液未凝固之前及時(shí)**，否則，需重新制膠。
4、電泳時(shí)溴酚蘭在瓊脂糖凝膠中的運(yùn)動(dòng)速度可以用于參考電泳速度，已實(shí)際電泳條帶運(yùn)動(dòng)速度為準(zhǔn)。
常見(jiàn)問(wèn)題分析
常見(jiàn)問(wèn)題 | 原因 | 對(duì)策 |
DNA條帶模糊 | DNA降解 | 實(shí)驗(yàn)過(guò)程避免核酸酶污染 |
電泳緩沖液陳舊 | 電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低，PH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果。TBE建議使用10次就更換緩沖液 | |
所用電泳條件不合適 | 電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過(guò)6V/CM，溫度＜30℃，巨大DNA鏈電泳，溫度應(yīng)＜15℃，核查所用電泳緩沖液的緩沖能力，注意經(jīng)常更換 | |
DNA上樣量過(guò)多 | 減少凝膠中DNA上樣量 | |
DNA含鹽過(guò)高 | 電泳前通過(guò)乙醇沉淀去除多余鹽分 | |
有蛋白污染 | 電泳前酚抽提去除蛋白 | |
DNA變性 | 電泳前勿加熱，用TE緩沖液稀釋DNA | |
出現(xiàn)片狀拖帶或涂抹帶 | PCR擴(kuò)增有時(shí)出現(xiàn)涂抹帶或片狀帶或地毯樣帶。其原因往往PCR體系需要優(yōu)化，PCR程序需要摸索。 | 其對(duì)策有：調(diào)整PCR體系和PCR程序，摸索出合適的條件。 |
不規(guī)則DNA帶遷移 | 電泳條件不合適 | 電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過(guò)6V/CM，溫度＜30℃，巨大DNA鏈電泳，溫度應(yīng)＜15℃，核查所用電泳緩沖液的緩沖能力，注意經(jīng)常更換 |
DNA變性 | 電泳前勿加熱，用TE緩沖液稀釋DNA | |
帶弱或無(wú)DNA帶 | DNA上樣量不夠 | 增加DNA上樣量，聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度高，上樣量可適當(dāng)降低 |
DNA降解 | 實(shí)驗(yàn)過(guò)程避免核酸酶污染 | |
DNA跑出凝膠 | 縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度 | |
EB染色的DNA，所用光源不合適 | 應(yīng)用短波長(zhǎng)（254nm）的紫外光源 | |
DNA帶缺失 | DNA跑出凝膠 | 縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度 |
分子大小相近的DNA帶不易分辨 | 增加電泳時(shí)間，核準(zhǔn)正確凝膠濃度 | |
DNA變性 | 電泳前勿加熱，用20mM Nacl 緩沖液稀釋DNA | |
DNA鏈巨大，常規(guī)凝膠電泳不合適 | 在脈沖凝膠電泳上分析 | |
電泳時(shí)Ladder扭曲 | 配膠的緩沖液和電泳緩沖液不是同時(shí)配置 | 同時(shí)配置，電泳緩沖液高出液面1-2mm即可 |
電泳時(shí)電壓過(guò)高 | 電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過(guò)6V/CM |
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